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水凝膠預防缺氧性腦損傷的作用(其林貝爾GL-8

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-11-26 09:24【

缺氧會導致機體臟器功能、內分泌、組織形態(tài) 等出現(xiàn)一系列代償性變化。大腦本身無葡萄糖與 氧氣的儲備,完全依賴血液流通供應養(yǎng)料。因此, 大腦對缺血缺氧的耐受力極差,血液運行受阻易導 致腦組織水腫、神經細胞受損、神經功能紊亂等一 系列腦損傷。這種腦損傷主要與神經細胞凋亡、 氧自由基大量累積有關。

1 材料與方法

1. 1 儀器

全自動血細胞分析儀(MEK-7222K),日本光電 工業(yè)株式會社;電子天平(Sartorius BS110s),北京賽 多利斯天平有限公司;鼓風干燥箱(DHG-9140A), 上海一恒科學儀器有限公司;超低溫冰箱(DW86L828),青島海爾特種電器有限公司;倒置數(shù)碼顯 微鏡(BDS400),重慶奧特光學有限公司;渦旋混合 器(GL-88B),海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1. 2 藥物和試劑

泊洛沙姆 188(poloxamer 188)、泊洛沙姆 407 (poloxamer 407),德國巴斯夫(BASF)公司;CBD,云 南漢素生物科技有限公司;知母皂苷 BⅡ(純度> 98%),軍事科學院軍事醫(yī)學研究院輻射醫(yī)學研究所 馬百平研究員提供;葛根素(純度 98%),西安昊軒生物科技有限公司;G20(批號:20171102,純度> 99%)、血 細 胞 分 析 用 稀 釋 液 MEK- 640(批 號 : 19011078)、生理鹽水(批號:1805293204),石家莊 四藥有限公司;乙醇(批號:20190113),北京市通廣 精細化工公司;超純水,實驗室自制。

1. 3 實驗動物

35只SPF級健康雄性BALB/c小鼠,體質量18~ 22 g,北京維通利華實驗動物技術有限公司,動物許 可證號:SCXK(京)2016-0006,動物飼養(yǎng)環(huán)境溫度為 21~26℃,濕度 45%~55%。所有實驗操作均遵循本 單位實驗動物倫理委員會規(guī)定。

1. 4 空白及載藥水凝膠制備

精密稱取12 g泊洛沙姆407、2 g泊洛沙姆188, 加超純水45 ml,溶脹24 h后,得到空白凝膠。分別 精密稱取150 mg 葛根素、G20、知母皂BⅡ、CBD,溶 于適當體積的對應溶劑,再加所需體積的空白凝膠 攪拌溶解定容即得4種水凝膠。其對應溶劑配方如 下: 葛根素(30 mg/ml)∶1.4 ml乙醇和3.6 ml空白凝 膠;G20(30 mg/ml):超純水1.5 ml和空白凝膠3.6 ml; 知母皂苷 BII(25 mg/ml)∶1.5 ml 超純水和 3.5 ml 空 白凝膠;CBD(25 mg/ml):600 μl丙二醇、800 μl乙醇 和空白凝膠4.6 ml。

1. 5 分組及給藥方案

SPF 級健康雄性 BALB/c 小鼠,隨機分為 7 組 (n=5):正常組、生理鹽水組、空白凝膠組、葛根素水 凝膠組(30 mg/kg)、G20 水凝膠組(30 mg/kg)、知母 皂 苷 BⅡ 水 凝 膠 組(25 mg/kg)、CBD 水 凝 膠 組 (25 mg/kg)。4種藥物水凝膠組按給藥劑量每日單 側鼻孔給藥20 μl;空白凝膠組單側鼻孔給藥空白水 凝膠 20 μl;生理鹽水組單側鼻孔給藥 0.9%生理鹽 水20 μl;正常組不作任何處理。

1. 6 外周血細胞計數(shù)

連續(xù)給藥8 d后,最后1次給藥1 h后小鼠尾靜 脈取血。小鼠尾靜脈取血10 μl,迅速注入血細胞分 析用稀釋液中,輕輕搖勻,使血液均勻分散在與全 自動血細胞分析儀匹配的成品稀釋液中,避免凝血 塊出現(xiàn) 。全自動血細胞分析儀檢測紅細胞(red blood cell,RBC)計數(shù)、血紅蛋白(hemoglobin,HGB) 含量、白細胞(white blood cell,WBC)計數(shù)。

1. 7 常壓密閉缺氧實驗

小鼠取血完成后,用酒精棉球擦拭傷口止血。 隨后將小鼠置盛有鈉石灰和濾紙的 250 ml 廣口瓶中(鈉石灰和濾紙用于吸收CO2和水),瓶口涂抹凡 士林后密封,計時至小鼠呼吸停止,即為小鼠在缺 氧環(huán)境下標準缺氧耐受時間 ,分別計算與生理鹽 水組相比的標準缺氧時間(T),公式如下 : T=T0×100(/ V0-W0/0.94),式中T0為小鼠耐缺氧時 間(min);V0為廣口瓶體積(ml);W0為小鼠體質量(g)。

2 結果

2. 1 載藥水凝膠能明顯延長

小鼠常壓密閉缺氧條 件下標準缺氧耐受時間 與生理鹽水組比較,G20和CBD水凝膠組能顯 著延長常壓密閉缺氧小鼠的標準缺氧耐受時間 (P<0.01,P<0.05)。

2. 2 外周血細胞計數(shù)改變

葛根素、知母皂苷 BⅡ的 RBC 數(shù)、HGB 數(shù)與生 理鹽水組無顯著性差異,而G20、CBD組RBC(P<0.01, P<0.05)、HGB(P<0.05,P<0.05)數(shù)量與生理鹽水 組比較顯著升高??瞻啄z組、各給藥組WBC數(shù)與 生理鹽水組比無顯著性差異,G20組略有升高,但無 顯著性差異。

2. 3 載藥水凝膠減輕腦組織病理損傷、降低HIF-1α 表達

正常小鼠腦組織血管清晰可見,神經細胞狀態(tài) 完整,神經元無明顯損傷。與正常組相比,生理鹽水組和空白凝膠組小鼠的海馬和皮質區(qū)神經元細 胞呈彌漫性水腫,血管與組織之間形成較大縫隙, 細胞核固縮深染,排列較亂、密集,說明密閉缺氧對 小鼠神經細胞造成腦損傷;G20 組病變有所改善, CBD組、葛根素組和知母皂苷BⅡ組較空白凝膠組 稍有改善,仍有部分核固縮深染。

3 討論

本研究采用泊洛沙姆制備的載藥水凝膠,藥物 溶解后均勻分散在凝膠基質中,可實現(xiàn)藥物到達鼻 腔后形成半固體凝膠狀,具有緩釋效果。同時通過 鼻腔給藥,實現(xiàn)藥物通過嗅黏膜上皮細胞以及三叉 神經通道進入中樞神經系統(tǒng),實現(xiàn)鼻腔腦靶向。



 


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