月腺大戟為大戟科大戟屬多年生草本植物，生于山坡、草地或林 下，分布于全國，主要產(chǎn)地為安徽、江蘇、河南、湖北、 山東等省。月腺大戟作為傳統(tǒng)中藥已有２０００年歷 史，始記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：根入藥，性平，味辛，有 大毒。功能主治：逐水散結(jié)，破積殺蟲。用于治療 消化不良、水腫、咳嗽、哮喘、皮癬、皮炎等疾病，對于結(jié)核和癌癥的治療亦有明顯效果。

ＡＶＡＮＣＥＩＩＩ６００高分辨核磁共振波譜儀系統(tǒng) （德國布魯克科技有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ１２６０高效液相 色譜儀、Ａｇｉｌｅｎｔ６２２０飛行時間質(zhì)譜儀（美國安捷倫 科技有限公司）；ＬＣ－２０ＡＰ制備液相色譜儀（日本島 津公司）；ＳＭＡＲＴ－Ｎ 超純水機(jī)（香港力康生物醫(yī) 療 科技控股有限公司）；ＲＥ－５２型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上 海 申 生 科 技 有 限 公 司）；Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＫ３ 酶 標(biāo) 儀 （美 國 Ｔｈｅｒｍｏ）；ＣＯ２培養(yǎng)箱（美國 Ｔｈｅｒｍｏ）；ＴＳ－１００搖床 （海門其林貝爾）；ＸＤＳ－２００倒 置 顯 微 鏡（上 海 蔡 康 光學(xué)）；ＳＢ３２００－Ｔ 超 聲 發(fā) 生 器（上 海 科 導(dǎo)，５０ＫＨｚ， １２０ Ｗ）；１８ＸＷ－８０Ａ 型 旋 渦 混 合 器 （海 門 其 林 貝 爾），ＡＥ２４０型十萬分之一電子天平（瑞士梅特勒）；全 自動手持式細(xì)胞計數(shù)器Ｓｃｅｐｔｅｒ２．０（美國 Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。

所用試劑（江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司）均 為分析純試劑，水為本實(shí)驗(yàn)室制備的超純水。玻璃 層析柱（江蘇南通三晶玻璃儀器有限公司）；Ｋｒｏｍａ－ ｓｉｌ１００－５Ｃ１８制備柱（５０ｍｍ×２５０ｍｍ）；柱層析用硅 膠、硅膠 ＧＦ２５４薄 層 板（山 東 煙 臺 江 友 化 工 有 限 公 司）；羥丙基葡聚糖凝膠ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０（上海國藥 集團(tuán)化學(xué)試 劑 有 限 公 司），反 相 Ｃ１８硅 膠（日 本 大 曹 株式會社）。 乳腺癌細(xì)胞株 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｓｕｍ１４９、ＭＣＦ７、 ＺＲ－７５－１、ＳＫＢｒ３、ＢＴ４７４（南京科佰生物科技有限公 司，來源 ＡＴＣＣ）；紫 杉 醇（北 京 譜 析）；澳 洲 胎 牛 血 清、ＤＭＥＭ 培養(yǎng)基、ＰＢＳ溶液、０．５％胰蛋白酶（美國 Ｇｉｂｃｏ公司）。 中藥月腺大戟飲片購自安徽（產(chǎn)地山東，批號： ２０１４０８１１），經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室的韓 婷副教授 鑒 定 為 大 戟 科 大 戟 屬 植 物 月 腺 大 戟ｅｕ－ ｐｈｏｒｂｉａｅｂｒａｃｔｅｏｌａｔａ Ｈａｙａｔａ．的干燥根。

取月腺大戟藥材３０ｋｇ粉碎后，用８倍量體積分 數(shù)為８０％的乙醇于６５℃下依次熱提２次，每次２ｈ，合 并２次濾液減壓回收溶劑至無醇?xì)埩?，得濃縮液體積 ７Ｌ。取濃縮液２Ｌ，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇 各萃取３次，每次加入萃取溶劑體積２Ｌ。分別合并 各萃取層溶液，減壓回收溶劑，得石油醚浸膏５０ｇ，乙 酸乙酯浸膏１３５ｇ，正丁醇浸膏２５０ｇ。 取乙酸乙酯浸 膏１３５ｇ過正相硅膠柱層析（石 油醚：乙酸乙酯，５０∶１～１∶１洗脫），得到９個餾分 Ｆｒ１－Ｆｒ９，分別取 Ｆｒ１（２０ｇ）、Ｆｒ２（２０ｇ）用石油醚∶ 乙酸乙 酯 ∶ 甲 醇（從 石 油 醚 ∶ 乙 酸 乙 酯 ∶ 甲 醇 ＝ １００∶１∶１，５０∶１∶１，２０∶１∶１；１０∶１∶１；２∶１∶ １；１∶１∶１，每個體積約１．５Ｌ）梯度洗脫，Ｆｒ１分離 得到化合物７（１７０ｍｇ），８（５２ｍｇ），９（６０ｍｇ）；Ｆｒ２ 分離 得 到 化 合 物 １ （４５ ｍｇ）；取 Ｆｒ３（１５ｇ）、Ｆｒ４ （１５ｇ）經(jīng)反相 Ｃ１８硅膠用氯仿：甲醇（氯仿：甲 醇＝ ２０∶１；１０∶１；５∶１；２∶１；每 個 體 積 約１．５Ｌ）梯 度 洗脫，從Ｆｒ３中分離得到化合物５（３７ｍｇ），６（４５ｍｇ）； 從 Ｆｒ４中得到化合物 ２（３４ｍｇ），３（２７ｍｇ）；從Ｆｒ９ （１５ｇ）中經(jīng)反相 Ｃ１８硅膠用甲醇洗脫分離得到３個 餾分：Ｆｒ９－１，Ｆｒ９－２，Ｆｒ９－３；對 Ｆｒ９－１ （１．２ｇ），Ｆｒ９－２ （１．５ｇ）用 ＬＨ－２０柱，采用甲醇水（甲醇：水＝５０％， 洗脫體積８Ｌ）洗脫，最后得到化合物４（２５ｍｇ），１０ （２６ｍｇ）。

采用 ＡｇｉｌｅｎｔＨＰＬＣ－ＥＳＩ－ＴＯＦ／ＭＳ對月腺大戟 中分離得到的１０個單體化合物進(jìn)行分子量和分子 式的分析，采用 ＢｒｕｋｅｒＡＶＡＮＣＥＩＩＩ６００ 高分辨核 磁共振波譜儀采集１ Ｈ－ＮＭＲ 譜 與１３Ｃ－ＮＭＲ 譜 數(shù) 據(jù)。結(jié)合理化性質(zhì)及現(xiàn)有文獻(xiàn)中報道的核磁數(shù)據(jù)， 對化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。 化合物１：無色針晶，Ｃ１０Ｈ１０Ｏ５，ＥＳＩ－ＭＳ的質(zhì)核 比 （Ｍ／Ｚ）為 ２１１．０５３１ ［Ｍ ＋ Ｈ］＋ 。１ Ｈ－ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ，ｐｐｍ）：１５．３９ （１Ｈ，ｓ，３－ＯＨ）， １３．０１（１Ｈ，ｓ，３－ＣＨＯ），１０．２０ （１Ｈ，ｓ，４－ＯＨ），５．９０ （１Ｈ，ｓ，Ｈ－５），３．９８ （３Ｈ，ｓ，６－ＯＣＨ３），２．６２ （３Ｈ，ｓ， １－ＣＯＣＨ３）．１３Ｃ－ＮＭＲ （１５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，δ，ｐｐｍ）： ２０４．８，３４．２ （１－ＣＯＣＨ３ ），１９４．０ （３－ＣＨＯ），１７２．８ （Ｃ－４），１７１．７ （Ｃ－６），１６９．９ （Ｃ－２），１０６．５ （Ｃ－３）， １０５．９（Ｃ－１），９２．２ （Ｃ－５），５７．６ （６－ＯＣＨ３）．以上數(shù) 據(jù)與文獻(xiàn)基本一致，鑒定化合物為２，４－二羥基－６－ 甲氧基－３－甲酰基苯乙酮。

本次研究采用多種分離技術(shù)和鑒別方法對月腺 大戟的化學(xué)成分開展了進(jìn)一步研究，從中分離１０個 化合物，并對其進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析。其中分析得到４個 苯乙酮類化合物，３個二萜類化合物，１個三萜類化 合物和２個脂肪酸酯類化合物?；?合 物 ６、７、８、１０ 為首次從該植物中分離得到。采用 ＭＴＴ 法選用６ 種乳腺癌細(xì)胞 測 試 ４ 個苯乙酮類化合物的抗乳腺 癌活性，化合物３顯示出明顯的抗乳腺癌活性，化合 物 ４對乳腺癌細(xì)胞抑制活性較弱，化合物 １和化合 物 ２未表現(xiàn)出生物活性?；衔?１和 化 合 物 ２均 為單苯乙酮化合物，化合物 ３和化合物 ４均為雙苯 乙酮類化合物，化合物 ３為對稱的甲基取代對稱的 雙苯乙酮，化合物 ４為非對稱的無甲基取代對稱的 雙苯乙酮，化合物３對抗乳腺癌細(xì)胞的生物活性較 化合物 ４顯著，而單苯乙酮類化合物 １和化合物 ２ 對乳腺癌細(xì)胞未表現(xiàn)出抑制活性。



 

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