白藜蘆醇（Resveratrol，RES），化學(xué)名為 3，5，4’-三 羥基芪，是非黃酮類(lèi)多酚化合物，其主要存在于花生、 葡萄、虎杖等植物中。研究表明，RES具有廣泛的藥 理作用，主要包括免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、保護(hù) 心血管等作用。RES 屬于生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)（BCS）Ⅱ藥物，其易溶于乙醇、甲醇、二甲基亞砜等有機(jī) 溶劑，然而在水中的溶解度極低，僅為30 μg/mL，且 具有光不穩(wěn)定性。由于RES的水溶性差、性質(zhì)不穩(wěn)定、 生物利用度低，限制了其在臨床上的應(yīng)用。

1 材料

1.1 儀器

FA1004 精密電子天平（天津天馬衡基儀器有限公 司）；LC-2010A 高效液相色譜儀（日本島津公司）；Vortex-5 渦旋混合器（海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司）； TGL-16g 高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；UV1600 紫外分光光度計(jì)（上海美普達(dá)儀器有限公司）；Bioq-8000 噴霧干燥儀[匯和堂生物工程設(shè)備（上海）有限公司]。

1.2 藥品與試劑

RES 原料藥（武漢遠(yuǎn)成共創(chuàng)科技有限公司，批號(hào)： 20171225，純度：98％）；RES對(duì)照品（南京森貝伽生物科 技有限公司，批號(hào)：111535-201502，純度：98％）；卡馬西 平對(duì)照品（內(nèi)標(biāo)，上海哈靈生物科技有限公司，批號(hào)： 100142-201605，純度：98％）；RES/HP-β-CD/Chitosan（遼 寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院自制，批號(hào)：20180321，RES 含量： 12％）；HP-β-CD（山東濱州智源生物科技有限公司，批 號(hào)：20171201）；Chitosan（濰坊海之源生物制品有限公 司，批號(hào)：160815A）；乙腈（瑞典歐森巴克化學(xué)公司，色譜 級(jí)）；醋酸（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。

1.3 動(dòng)物

健康SD大鼠18只，♂，體質(zhì)量（250±20）g，由遼寧 長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證 號(hào)為SCXK（遼）2015-0001。

2 方法與結(jié)果

2.1 制劑中RES的含量測(cè)定

2.1.1 紫外吸收波長(zhǎng)的選擇

取干燥至恒質(zhì)量的 RES 對(duì)照品適量，置于量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超聲（功 率：180 W，頻率：59 kHz，時(shí)間：2 min，下同）溶解，并用 無(wú)水乙醇稀釋成質(zhì)量濃度為5 μg/mL的溶液，同法配制 相應(yīng)濃度的輔料溶液，采用紫外分光光度法，在 200～ 400 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果顯示，RES 在 307 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，輔料對(duì)其測(cè)定無(wú)干擾，故選 擇307 nm 波長(zhǎng)作為 RES 的含量測(cè)定波長(zhǎng)。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱(chēng)取干燥至恒質(zhì)量的 RES 對(duì)照品 30 mg，置于 100 mL 量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超聲溶解，并用無(wú)水乙醇定容至刻度，制成RES貯 備液。分別精密移取 RES 貯備液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL，置于100 mL量瓶中，無(wú)水乙醇稀釋至刻 度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為1.8、2.4、3.0、3.6、4.2、4.8、5.4、 6.0 µg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。采用紫外分光光度法，在 307 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)（y），質(zhì)量 濃度為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行回歸分析，得回歸方程為 y＝ 0.130 1x－0.009 2（R2 ＝0.999 7），結(jié)果表明，RES質(zhì)量濃 度在1.8～6.0 µg/mL范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。

2.1.3 精密度試驗(yàn)

取 RES/HP-β-CD/Chitosan，研細(xì)， 精密稱(chēng)取適量，置于100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL， 超聲，使RES溶解，放冷，加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻， 經(jīng) 0.45 μm 微孔濾膜濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液 1 mL，置于 100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，制成RES質(zhì)量 濃度分別為 2.8、4.2、5.4 μg/mL（低、中、高質(zhì)量濃度）的 供試品溶液。在307 nm波長(zhǎng)處測(cè)定供試品溶液中RES 吸光度，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算日內(nèi)精密度；連續(xù) 測(cè)定3 d，計(jì)算日間精密度。結(jié)果顯示，低、中、高質(zhì)量濃 度供試品溶液的日內(nèi)RSD分別為0.30％、0.32％、0.25％ （n＝3）；日間RSD分別為0.48％、0.21％、0.27％（n＝3）， 均符合方法學(xué)要求。

2.1.4 回收率試驗(yàn)

分別稱(chēng)取 24、30、36 mg 的 RES 對(duì) 照品以及 RES/HP-β-CD/Chitosan 相應(yīng)處方量的輔料于 100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL，超聲，使RES溶解，放 冷，加無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾 液1 mL，置于100 mL量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度， 搖勻，每個(gè)濃度制備3份，在307 nm波長(zhǎng)處測(cè)定RES吸 光度，計(jì)算含量。以RES的測(cè)得值與加入值進(jìn)行比較， 計(jì)算回收率。結(jié)果顯示，平均回收率分別為 100.00％、 100.24％、99.70％（n＝3），符合方法學(xué)要求。


3 討論

本課題組先通過(guò)制備RES/HP-β-CD 提高RES的體 外釋放度；再利用Chitosan是自然界廣泛存在的多糖，具 有良好的生物相容性、生物黏附性的特性，且對(duì)細(xì)胞無(wú) 毒 ，對(duì) RES/HP-β-CD 進(jìn)行改良，制得 RES/HP-β-CD/ Chitosan。本文體外釋放度試驗(yàn)和大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究均表明，與RES原料藥比較，RES/HP-β-CD的體外釋放 度明顯增加，體內(nèi)藥物濃度也明顯增加；與 RES/HP-βCD 比較，RES/HP-β-CD/Chitosan 的釋放明顯減緩；且 RES/HP-β-CD/Chitosan 的 AUC0-12 h是 RES 原料藥的 5.5 倍。該緩釋載藥系統(tǒng)提高藥物生物利用度的主要原因 如下：
（1）由于Chitosan在稀酸條件下，氨基質(zhì)子化，形成 NH3+ 。質(zhì)子化后，正電荷互相排斥使得Chitosan分子鏈 呈舒展?fàn)顟B(tài)，黏度增大，在微球表面形成凝膠，延緩藥物 釋放；
（2）由于細(xì)胞膜表面為負(fù)電荷，通過(guò)正、負(fù)電荷吸 引Chitosan與黏膜產(chǎn)生黏附作用，延長(zhǎng)藥物在胃腸道的 滯留時(shí)間，從而增加藥物生物利用度；
（3）Chitosan可 以改變 F肌動(dòng)蛋白（F-actin）的分布從而影響細(xì)胞間緊密 連接的，通過(guò)打開(kāi)連接增加黏膜的通透性，使藥物更好 地吸收。


 

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